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胰蛋白酶
胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 為蛋白酶的一種，EC3.4.21.4。在脊椎動(dòng)物中，作為消化酶而起作用。在胰臟是作為酶的前體胰蛋白酶原而被合成的。作為胰液的成分而分泌，受腸激酶，或胰蛋白酶的限制分解成為活化胰蛋白酶，是肽鏈內(nèi)切酶，它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切斷。它不僅起消化酶的作用，而且還能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體，起活化作用。是特異性最強(qiáng)的蛋白酶，在決定蛋白質(zhì)的氨基酸排列中，它成為不可缺少的工具。
介紹
牛的胰蛋白酶氨基酸殘基223個(gè)，分子量為23300，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。除存在于脊椎動(dòng)物外，還存在于蠶、海盤車、蝲姑、放線菌等范圍廣泛的生物體中。另外與高等動(dòng)物的血液凝固和炎癥癥等有關(guān)的凝血酶、纖溶酶、舒血管素等蛋白酶在化學(xué)結(jié)構(gòu)和特異性等方面與胰蛋白酶具有密切的關(guān)系，可以認(rèn)為這些酶是從共同的祖先酶在進(jìn)化過(guò)程中分化而來(lái)的。胰糜蛋白酶與彈性蛋白酶在結(jié)構(gòu)和催化機(jī)制方面也具有密切關(guān)系，但其特異性則完全不同�！ ∫鹊鞍酌赶底耘�、羊或豬胰中提取的一種蛋白水解酶。中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定按干燥品計(jì)算，每1mg 的效價(jià)不得少于2500單位。 由牛、羊、豬胰臟提取而得的一種肽鏈內(nèi)切酶，只斷裂賴氨酸或精氨酸的羧基參與形成的肽鍵。白色或米黃色結(jié)晶性粉末。溶于水，不溶于乙醇、甘油、氯仿和乙醚。分子量24 000，pI 10.5，最適pH值7.8～8.5左右。pH>9.0不可逆失活。Ca2+對(duì)酶活性有穩(wěn)定作用；重金屬離子、有機(jī)磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶抑制劑對(duì)其活性有強(qiáng)烈抑制。臨床用于抗炎消腫，工業(yè)上用于皮革制造、生絲處理、食品加工等。
作用和用途
蛋白質(zhì)水解酶，能選擇地水解蛋白質(zhì)中由賴氨酸或精氨酸的羧基所構(gòu)成的肽鏈，能消化溶解變性蛋質(zhì)，對(duì)未變性的蛋白質(zhì)無(wú)作用，因此，能使膿、痰液、血凝塊等分解、變稀，易于引流排除，加速創(chuàng)面凈化，促進(jìn)肉芽組織新生，此外還有抗炎癥作用。臨床上用于膿胸、血胸、外科炎癥、潰瘍、創(chuàng)傷性損傷、瘺管等所產(chǎn)生的局部水腫、血腫及膿腫等。噴霧吸入，用于呼吸道疾病。也可用于治療毒蛇咬傷。還常用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)前對(duì)組織的處理。
細(xì)胞培養(yǎng)用胰蛋白酶溶液的配制與消毒
胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在 pH 為 8.0 、溫度為 37℃ 時(shí)，胰酶溶液的作用能力最強(qiáng)。使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。因 Ca2+ 、 Mg2+ 和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含 Ca2+ 、 Mg2+ 的 BSS ，如： D-Hanks 液。終止消化時(shí)，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用�！ �
1. 稱取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度為 0.25 %，用電子天平準(zhǔn)確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水（若用雙蒸水需要調(diào) PH 到 7.2 左右）或 PBS （ D-hanks ）液中。攪拌混勻，置于 4℃ 內(nèi)過(guò)夜�！ �
2. 用注射濾器抽濾消毒：配好的胰酶溶液要在超凈臺(tái)內(nèi)用注射濾器（ 0.22 微米微孔濾膜）抽濾除菌。然后分裝成小瓶于 -20℃ 保存以備使用。
介紹
牛的胰蛋白酶氨基酸殘基223個(gè)，分子量為23300，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。除存在于脊椎動(dòng)物外，還存在于蠶、海盤車、蝲姑、放線菌等范圍廣泛的生物體中。另外與高等動(dòng)物的血液凝固和炎癥癥等有關(guān)的凝血酶、纖溶酶、舒血管素等蛋白酶在化學(xué)結(jié)構(gòu)和特異性等方面與胰蛋白酶具有密切的關(guān)系，可以認(rèn)為這些酶是從共同的祖先酶在進(jìn)化過(guò)程中分化而來(lái)的。胰糜蛋白酶與彈性蛋白酶在結(jié)構(gòu)和催化機(jī)制方面也具有密切關(guān)系，但其特異性則完全不同�！ ∫鹊鞍酌赶底耘�、羊或豬胰中提取的一種蛋白水解酶。中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定按干燥品計(jì)算，每1mg 的效價(jià)不得少于2500單位。 由牛、羊、豬胰臟提取而得的一種肽鏈內(nèi)切酶，只斷裂賴氨酸或精氨酸的羧基參與形成的肽鍵。白色或米黃色結(jié)晶性粉末。溶于水，不溶于乙醇、甘油、氯仿和乙醚。分子量24 000，pI 10.5，最適pH值7.8～8.5左右。pH>9.0不可逆失活。Ca2+對(duì)酶活性有穩(wěn)定作用；重金屬離子、有機(jī)磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶抑制劑對(duì)其活性有強(qiáng)烈抑制。臨床用于抗炎消腫，工業(yè)上用于皮革制造、生絲處理、食品加工等。
作用和用途
蛋白質(zhì)水解酶，能選擇地水解蛋白質(zhì)中由賴氨酸或精氨酸的羧基所構(gòu)成的肽鏈，能消化溶解變性蛋質(zhì)，對(duì)未變性的蛋白質(zhì)無(wú)作用，因此，能使膿、痰液、血凝塊等分解、變稀，易于引流排除，加速創(chuàng)面凈化，促進(jìn)肉芽組織新生，此外還有抗炎癥作用。臨床上用于膿胸、血胸、外科炎癥、潰瘍、創(chuàng)傷性損傷、瘺管等所產(chǎn)生的局部水腫、血腫及膿腫等。噴霧吸入，用于呼吸道疾病。也可用于治療毒蛇咬傷。還常用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)前對(duì)組織的處理。
細(xì)胞培養(yǎng)用胰蛋白酶溶液的配制與消毒
胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在 pH 為 8.0 、溫度為 37℃ 時(shí)，胰酶溶液的作用能力最強(qiáng)。使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。因 Ca2+ 、 Mg2+ 和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含 Ca2+ 、 Mg2+ 的 BSS ，如： D-Hanks 液。終止消化時(shí)，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用�！ �
1. 稱取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度為 0.25 %，用電子天平準(zhǔn)確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水（若用雙蒸水需要調(diào) PH 到 7.2 左右）或 PBS （ D-hanks ）液中。攪拌混勻，置于 4℃ 內(nèi)過(guò)夜�！ �
2. 用注射濾器抽濾消毒：配好的胰酶溶液要在超凈臺(tái)內(nèi)用注射濾器（ 0.22 微米微孔濾膜）抽濾除菌。然后分裝成小瓶于 -20℃ 保存以備使用。
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